۳-۲-۶-۱ استوک اکسی تترا سایکلین: ﻣﺤﻠﻮل اﺳﺘﻮک اوﻟﻴﻪ از داروی اکسی تترا سایکلین ﺑﺎ ﻏﻠﻈﺖ ppm 100 از حل شدن ۱/. گرم داروی اکسی تتراسایکلین در حجم ۵۰۰ سی سی آب مقطر تهیه شد.
۳-۲-۶-۲ بافرها:بافر ها در دامنه ی ۹-۲ pH= در جهت بهینه سازی محیط به منظور جذب دارو ﺗﻮﺳﻂ اﻛﺴﻴﺪ ﮔﺮاﻓﻦ ﻋﺎﻣﻞ دار ﺷﺪه تهیه شد.برای تهیه ی بافر اسیدی با ۳/۲ pH= از HCl استفاده شد.روش ﺗﺠﺮﺑﻲ ﺑﺮای ﺗﻬﻴﻪ اﻳﻦ ﺑﺎﻓﺮها ﺑﺪﻳﻦ ﺻﻮرت بود:

• • ﺑﺎﻓﺮﻫﺎی HCl ﺑﺎ ۳/۲ pH= :

ﻣﺤﻠﻮل ۰٫۰۱ ﻣﻮﻻر HCl ﺗﻬﻴﻪ ﺷﺪ . ﺑﺎﻗﺮار دادن ﻳﻚ pH ﻣﺘﺮ داﺧﻞ ﻳﻚ ﻇﺮف ﺣﺎوی آب ﻣﻘﻄﺮ و اﻓﺰودن اﺳﻴﺪ ﺑﻪ آن ﺑﺎﻓﺮ pH دﻟﺨﻮاه ﺳﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪ.

• • بافر استاتی ۷-۴=pH:

در ﺗﻬﻴﻪ اﻳﻦ ﺑﺎﻓﺮ از اﺳﺘﻴﻚ اﺳﻴﺪ CH₃COOH با ﺟﺮم ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻲ ۰۵/۶۰ و اﺳﺘﺎت ﺳﺪﻳﻢ CH₃COONa ﺑﺎ ﺟﺮم ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻲ ۰۳/۸۰ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ .روش ﺗﺠﺮﺑﻲ ﺑﺮای ﺗﻬﻴﻪ اﻳﻦ ﺑﺎﻓﺮ :
ﻣﺤﻠﻮل ۰۱/۰ ﻣﻮﻻر اﺳﺘﻴﻚ اﺳﻴﺪ ﺗﻬﻴﻪ ﺷﺪ و داﺧﻞ ﺑﺸﺮ رﻳﺨﺘﻪ ﺷﺪ.pH ﻣﺘﺮ و ﻫﻤﺰن داﺧﻞ ﺑﺸﺮ ﻗﺮار داده ﺷﺪ ﺳﭙﺲ ﻣﺤﻠﻮل ۰۱/۰ مولار اﺳﺘﺎت ﺳﺪﻳﻢ ﺑﻪ آراﻣﻲ اﺿﺎﻓﻪ ﺷﺪ و pH دﻟﺨﻮاه ﺳﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪ.

• • ﺑﺎﻓﺮ ﻓﺴﻔﺎﺗﻲ۹-۷ pH=:

ﺑﺮای ﺗﻬﻴﻪ اﻳﻦ ﺑﺎﻓﺮ ﻣﺤﻠﻮل۰٫۰۱ ﻣﻮﻻر ﺳﺪﻳﻢ دی ﻫﻴﺪروژن ﻓﺴﻔﺎت NaH₂ PO₄ ﺑﺎ ﺟﺮم ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻲ۹۷/۱۱۹ ﺗﻬﻴﻪ ﺷﺪ و داﺧﻞ ﺑﺸﺮ رﻳﺨﺘﻪ ﺷﺪو بعد از قرار دادن pH ﻣﺘﺮ و ﻫﻤﺰن داﺧﻞ ﺑﺸﺮ ﻛﻢ ﻛﻢ ﻣﺤﻠﻮل دی ﺳﺪﻳﻢ ﻫﻴﺪروژن ﻓﺴﻔﺎتHPO₄ Na₂ ﺑﺎ ﺟﺮم ﻣﻮﻟﻜﻮﻟﻲ۹۵/۱۱۴ اﺿﺎﻓﻪ ﺷﺪتا به pH دﻟﺨﻮاه رﺳﻴﺪﻳﻢ.
۳-۳ ﻣﺮاﺣﻞ ﺳﻨﺘﺰ اﻛﺴﻴﺪ ﮔﺮاﻓﻦ:
ﺳﻨﺘﺰ اﻛﺴﻴﺪ ﮔﺮاﻓﻦ ﺑﺮ ﻣﺒﻨﺎی روش ﻫﺎﻣﺮز اﻧﺠﺎم ﮔﺮﻓﺖ .اﻛﺴﻴﺪ ﮔﺮاﻓﻦ دارای ﮔﺮوﻫﻬﺎی ﻋﺎﻣﻠﻲ OH و COOH و –C-O-C- می باشد.جهت سنتز اکسید گرافن ابتدا ۱۸۰ سی سی اسید سولفوریک و ۲۰ سی سی اسید فسفریک را به نسبت ۹ به ۱ داخل یک بشر ۱۰۰۰ مخلوط کردیم.سپس ۳ گرمﮔﺮاﻓﻴﺖ ﺑﻪ آراﻣﻲ ﺑﻪ ﻣﺨﻠﻮط اﺿﺎﻓﻪ کردیم. ۹ﮔﺮم ﭘﺮﻣﻨﮕﻨﺎت ﻃﻲ ۹۰ تا۱۲۰ دقیقه ﺑﻪ آراﻣﻲ و ﻛﻢ ﻛﻢ ﺑﻪ ﺑﺸﺮ اﺿﺎﻓﻪ کردیم. داﺧﻞ ﺑﺸﺮ ﻣﮕﻨﺖ ﻗﺮار داده و روی ﻫﻴﺘﺮ در دﻣﺎی ۵۰ درجه ی سانتیگراد ( ﺑﺎ دور rpm 100) به مدت ۱۲ ساعت قرار دادیم. ﭘﺲ از آن ﺑﺸﺮ را (ﺟﻬﺖ ﺟﻠﻮﮔﻴﺮی از ﭘﺮﺗﺎب و ﺣﺘﻲ اﻧﻔﺠﺎر ﻣﻮاد ) داﺧﻞ ﺣﻤﺎم ﻳﺦ ﻗﺮار دادیم. ۳ ﺳﻲ ﺳﻲ آب اﻛﺴﻴﮋﻧﻪ ﺟﻬﺖ اﺣﻴﺎء ﭘﺮﻣﻨﮕﻨﺎت اﺿﺎﻓﻲ داﺧﻞ ﺑﺸﺮ رﻳﺨﺘم .ﺗﺮﻛﻴﺐ داﺧﻞ ﻇﺮف واﻛﻨﺶ درون ﻟﻮﻟﻪ ﻫﺎی ﺳﺎﻧﺘﺮﻳﻔﻴﻮژ رﻳﺨﺘﻪ ﺷﺪ و ﻫﺮ ﻟﻮﻟﻪ ﺑﻪ ﻣﺪت ۴ ﺳﺎﻋﺖ داﺧﻞ ﺳﺎﻧﺘﺮﻳﻔﻴﻮژ ﺑﺎ دور rpm 500 .ﻗﺮار داده ﺷﺪ و رﺳﻮب از ﻣﺤﻠﻮل ﺟﺪا ﺷﺪ.
شکل ۳-۱ دستگاه سانتریفیوژ مورد استفاده
شکل۳-۲:رسوب اکسید گرافن بعد از سانتریفیوژ
ﻣﺤﻠﻮل ﺟﺪا ﺷﺪه از رﺳﻮﺑﻲ ﻛﻪ ﺗﻪ ﻟﻮﻟﻪ ﻫﺎ ﺟﻤﻊ ﺷﺪه ﺑﻮد ﺳﺮ رﻳﺰ ﺷﺪ .رﺳﻮب ﺑﺎﻗﻴﻤﺎﻧﺪه ﺗﻪ ﻟﻮﻟﻪ با ۱۵۰ سی سی آب دﻳﻮﻧﻴﺰه ﺷﺴﺘﻪ ﺷﺪه و اﻳﻦ رﺳﻮب ﻣﺠﺪداً با ۱۰۰ سی سی HCl 20% شسته شد. رسوب باقیمانده مجددا با ۱۰۰ سی سی اتانول ﻣﻄﻠﻖ ﺷﺴﺘﻪ ﺷﺪه و در آﺧﺮﻳﻦ ﻣﺮﺣﻠﻪ ﺷﺴﺘﺸﻮی ﺑﻌﺪ از ﺳﺎﻧﺘﺮﻳﻔﻴﻮژ اﺗﺎﻧﻮل ﺟﺪا ﺷﺪه ﺳﺮرﻳﺰ ﺷﺪ،در نهایت رسوب باقیمانده با ۵۰ سی سی آب دیونیزه مخلوط و به مدت ۱ ساعت داخل اولتراسونیک قرار گرفت.
شکل ۴-۳ : دستگاه اولتراسونیک مورد استفاده
ﭘﺲ از ﭘﺨﺶ ﻛﺎﻣﻞ ﮔﺮاﻓﻦ در آب، ﻟﻮﻟﻪ ﻫﺎ ﺑﻪ ﻣﺪت ۴ ﺳﺎعت داخل سانتریفیوژ با دور rpm 400 ﻗﺮار ﮔﺮﻓﺘﻨﺪ ﺗﺎ رﺳﻮب ﻛﺎﻣﻼ از آب ﺟﺪا ﺷﺪ .آب روی رﺳﻮب ﺳﺮ رﻳﺰ ﺷﺪ ه و رﺳﻮب ﺗﻪ ﻟﻮﻟﻪ ﻫﺎ،ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از دی اﺗﻴﻞ اﺗﺮ درون ﺑﺎﻟﻮن روﺗﺎری ﺧﺎﻟﻲ شد.
ﺳﻨﺘﺰ ﺻﻮرت ﮔﺮﻓﺘﻪ ﺷﺪه ﺑﻪ اﻳﻦ روش ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺗﻜﻨﻴیک های FT-IRتایید شد.
شکل۴-۴ و شکل ۴-۵ دستگاه روتاری و بالون روتاری مورد استفاده
۳-۴ پیوند شیمیایی اکسید گرافن با اپی کلرو هیدرین:

• • اپی کلرو هیدرین:

این ماده شیمیایی از به صورت بیرنگ وبا قابلیت واکنش پذیری بسیار بالامی باشد که عموماً در تولید اپوکسی رزین ها ی مورد استفاده در صنایع رنگ سازی مورد استفاده قرار می گیرد. وزن مولوکولی این ترکیب ۵۳/۹۲ می باشد و فرمول مولکولی ان نیز به صورت C₃H₅CLO می باشد.

• • برقراری پیوند:

در اﺑﺘﺪا ۵/۲۱ سی سی ﺳﻮد دو مولار و ۰۷۵/۰ گرم ﺳﺪﻳﻢ ﺑﻮروﻫﻴﺪرﻳﺪ و ۴/۲ سی سی اپی کلروهیدرین را با هم مخلوط کردیم.سپس ۲ گرم اکسید گرافن را به مخلوط افزودیم و سه ساعت در دمای اتاق به هم زدیم پس از ان ۵/۳ سی سی سود دو مولار و ۲۵/۱ سی سی اپی کلروهیدرین را اضافه و در دمای ۵۰ درجه ی سانتیگراد به مدت یک روز بر روی شیکر قرار دادیم.سپس رﺳﻮب ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﻛﺎﻏﺬ ﺻﺎﻓﻲ ﺻﺎف ﺷﺪه و ﺑﺎ ۳۰ ﺳﻲ ﺳﻲ اﺳﺘﻴﻚ اﺳﻴﺪ ۰۱/۰ مولار و ۳۰ سی سی سدیم بیکربنات ۲/۰ مولار شستیم.
۳-۵ کوپل اکسید گرافن پیوند داده شده با سیباکرون بلو:

• • سیباکرون بلو:

ﻓﺮﻣﻮل ﺷﻴﻤﻴﺎﻳﻲ ﺳﻴﺒﺎﻛﺮون ﺑﻠﻮ C₂₉H₂₀ClN₇O₁₁S₃ و وزن مولوکولی ان ۱۶/۷۷۴ می باشد.
شکل ۳-۶ ساختار سیبا کرون بلو

• • برقراری پیوند:

۵/۱۲ سی سی سدیم بیکربنات ۲/۰ مولار با ۲/۰ گرم سیباکرون بلوو ﻣﺤﺼﻮل ﻣﺮﺣﻠﻪ ﻗﺒﻠﻲ (اﻛﺴﻴﺪ ﮔﺮاﻓﻦ ﻋﺎﻣﻞ دار ﺷﺪه ﺑﺎ اپی کلرو هیدرین) ترکیب و به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۵۰ درجه ی ﺳﺎﻧﺘﻴﮕﺮاد ﻫﻢ زده ﺷﺪ .ﺑﻌﺪ از ﺻﺎف ﻛﺮدن رﺳﻮب ﺑﻮﺳﻴﻠﻪ۵۰ ﺳﻲ ﺳﻲ آب دﻳﻮﻧﻴﺰه و ۵۰ سی سی اﺳﺘﻴﻚ اﺳﻴﺪ ۰۱/۰ ﻣﻮﻻر ﺑﺮای ﺑﺎر ﺳﻮم با ۵۰ سی سی آب دیونیزه رﺳﻮب ﺷﺴﺘﻪ ﺷﺪ ﺗﺎ رﻧﮓ آن ﻛﺎﻣﻼ ﺷﺴﺘﻪ و از ﺑﻴﻦ رﻓﺖ .
۳-۶ جذب داروی اکسی تترا سایکلین به وسیله ی اکسید گرافن عامل دار شده:
۳-۶-۱ مطاله و بررسی اثر pHبر جذب داروی اکسی تتراسایکلین:
هدف اﻳﻦ ﻣﺮﺣﻠﻪ تعیین pH بهینه ﺑﻪ ﻣﻨﻈﻮر ﺑﻪ دﺳﺖ آوردن بالاترین و ﻣﻄﻠﻮب ﺗﺮﻳﻦ ﻣﻴﺰان ﺟﺬب دارو، ﺗﻮﺳﻂ اﻛﺴﻴﺪ ﮔﺮاﻓﻦ ﺳﻨﺘﺰ ﺷﺪه ﻣﻲ ﺑﺎﺷﺪ .ﺑﻪ اﻳﻦ ﻣﻨﻈﻮر ﺑﺎﻓﺮﻫﺎﻳﻲ از pH 2 تا ۹ و ﺳﭙﺲ محلول استوک داروی اکسی تتراسایکلین ppm 100نیز ساخته شد.۵۰ سی سی محلول ppm 20 در pH های مختلف (۵ سی سی بافر+۱۰ سی سی دارو+الباقی آب دیونیزه)تهیه شد که از هرکدام ۳۰ سی سی به عنوان استاندارد UV جدا شد و در ۲۰ سی سی باقیمانده ۰۱/۰ گرم جاذب ریخته شد و به مدت ۴ ساعت در دمای اتاق بر روی شیکر قرار گرفت و هم خورد.بعد از ان محلول از صافی و فیلتر سر سرنگی عبور داده شد و از محلول زیر صافی و محلول استاندارد UV گرفته شد.میزان جذب انجام شده از روی جاذب محاسبه شد.بلانک مورد استفاده برای هر pH 5 سی سی از بافر همان pH بود.در اﻳﻦ ﻣﺮﺣﻠﻪ ﺟﺎذب، ﺟﺬب ﺷﻮﻧﺪه، زﻣﺎن و دور ﻫﻢ زن ﻳﻜﺴﺎن ﺑﻮد .ﺑﺮرﺳﻲ ﻫﺎ ﺑﺮای ﻳﺎﻓﺘﻦ pH ﺑﺎ ﺑﻴﺸﺘﺮﻳﻦ ﺟﺬب اﻧﺠﺎم ﺷﺪ.
۳-۶-۲ ﺗﻌﻴﻴﻦ ﻏﻠﻈﺖ ﺑﻬﻴﻨﻪ ﺟﺬب دارو ﺑﺮ روی اﻛﺴﻴﺪ ﮔﺮاﻓﻦ:
بعد از انتخاب ۳pH = به عنوان pH بهینه چهار محلول ppm ۳۰-۴۰-۵۰ ساخته شد. pH تمام محلول ها ۳ و ۰۱/۰ گرم جاذب به تمام محلول ها اضافه شد،سپس چهار ساعت باسرعت rpm 300 بر روی شیکر هم خورده شد.رسوب ها صاف و از محلول زیر صافی UV گرفته شد.سپس بیشترین جذب انتخاب شد.
شکل ۳-۷ نمونه های آزمایش شده
۳-۷ ﺑﺮرﺳﻲ رهایش داروی اکسی تترا سایکلین از روی اﻛﺴﻴﺪ ﮔﺮاﻓﻦ در ﻣﺤﻴﻂ ﺷﺒﻴﻪ ﺳﺎزی ﺷﺪه معده سگ:
۱۰۰ سی سی محلول ppm 100 از دارو با pH بهینه ی ۳ تهیه شد.۱/۰ گرم جاذب به آن اﺿﺎﻓﻪ ﺷﺪه و هم خورد و در نهایت صاف شد.۱۰۰ سی ی بافر HCL با ۳ pH= ﻣﺸﺎﺑﻪ ﺑﺎ ﻣﺤﻴﻂ معده سگ ﺳﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪ .رﺳﻮب ﺻﺎف ﺷﺪه ﻣﺮﺣﻠﻪ ﺑﺎﻻ ﺑﻪ آن اﺿﺎﻓﻪ ﺷﺪ .روی ﻫﻴﺘﺮ ﺷﻴﻜﺮ در دﻣﺎی ۳۸ درجه ی سانتیگراد (دمای بدن سگ) ثابت شد و طی ۸ﺳﺎﻋﺖ ( مقدار زمانی که غذا در معده سگ باقی می ماند)ﻫﺮ ﺳﺎﻋﺖ ﻳﻚ ﻧﻤﻮﻧﻪ از آن ﺑﺮداﺷﺘﻪ ﺷﺪ.سپس از تمام نمونه ها UV گرفته شد و اهنگ رهایش دارو بررسی شد.
شکل۳-۸ نمونه های گرفته شده از معده شبیه سازی سگ