۱۲-ظروف شیشه ای استریل جهت نگهداری عصاره
۱۳-لوله آزمایش
۱۴-گیاه درمنه کوهی جمع آوری شده ازاطراف شهرستان دامغان(انبان کوه)
۱۵-غذای مخصوص حیوان محصول شرکت خوراک دام پارس – ایران
۲-۱-۲وسایل ودستگاه ها
۱- قیف بوخنر وپمپ خلاء جهت صاف کردن عصاره
۲ -دستگاه تقطیر درخلاء چرخان(Rotary Evaporator)جهت حذف حلال
۲-فور یاAVEN جهت تغلیظ عصاره
۳-Heater stirrerجهت خشک کردن مقداری ازعصاره وتعیین درصد رطوبت
۴-vortex
۵- ترازوی دیجیتال Sartorius analytic برای توزین ترکیبات دارویی با دقت یک ده هزارم گرم
۶- ترازوی AND جهت توزین موشها با دقت یک صدم گرم
۷- یخچال
۸ـ کورنومتردیجیتال جهت محاسبه زمان در مراحل ثبت تشنج
۹- سمپلر
۱۰ـ سرنگ انسولین جهت تزریق درون صفاقی
۱۱ـ دستکش جراحی ویک بار مصرف
۱۲- ماسک یک بار مصرف
۱۳- استوانه مدرج
۱۴- پیپت ml10
۱۵- همزن شیشه ای

شکل ۲-۱ : مواد ، وسایل ودستگاه ها
۲-۱-۳ گیاه
گیاه درمنه(A.a) ( Artemisia .aucheri ) از ارتفاعات اطراف دامغان)استان سمنان) جمع،آوری گردید و به کمک بخش گیاه شناسی دانشگاه تهران شناسایی شد ( کد نمونه :۱۲۴، دکتر مظفریان).گیاه جمع اوری شده در درجه حرارت ۲۵ درجه سانتیگراد و در سایه خشک گردید. بخش هوایی گیاه توسط آسیاب مکانیکی پودر شدو برای عصاره گیری آماده گردید.
۲-۱-۴ حیوانات
حیوانات مورد استفاده در پژوهش حاضر موشهای سوری نر نژاد NMRI بودند که از انستیتوپاستور واقع در آمل تهیه شدند. در زمان تحویل، موشها با سن حدود ۶-۵ هفته و در محدوده وزنی ۲۸-۲۲ گرم بودند. آنها ضمن رعایت توصیه های نگهداری و پرورشی با شرایط مناسب به محل انجام پژوهش یعنی دانشگاه آزاد اسلامی واحد دامغان منتقل گردیدند. وتا یک هفته تحت هیچ نوع آزمایشی قرار نگرفتند .موشها در حیوانخانه دانشگاه تحت شرایط کنترل شده و دقیقی از جمله دوره های ۱۲ ساعت روشنایی و ۱۲ ساعت تاریکی، تهویه مناسب و درجه حرارت ۲۲-۱۸ درجه سانتیگراد ورطوبت نسبی۴۰-۶۰% ورعایت نکات بهداشتی نگهداری شدند و در تمام مدت نگهداری به جز هنگام آزمایش به راحتی به آب وغذا دسترسی داشتند.تغذیه حیوانات در این دوره پلت (plette) بود.
۲-۲ روش ها
۲-۲-۱ روش عصاره گیری (تهیه عصاره اتانلی گیاه)
بخشهای پودر شده گیاه ( حدود ۱۵۰ گرم)، برای عصاره گیری با ۱۵۰۰ میلی لیتر اتانول (۹۶ %) به مدت ۷۲ ساعت در دمای اتاق قرار گرفت وبعضی اوقات هم زده می شد، محلول حاصله توسط قیف بوخنرو کاغذ صافی صاف شدو سپس با بهره گرفتن از دستگاه روتاری با چرخش ۹۰ دور تحت شرایط فشار کاهشی ودمای ۴۰درجه سانتیگرادعصاره تغلیظ گردید. در نهایت پس از تعیین درصد رطوبت عصاره با ۶۴% رطوبت(وزن خشک۴۶%) برای کلیه مراحل ازمایش مورد استفاده قرار گرفت.
۲-۲-۲ روش تهیه محلول تزریقی از عصاره گیاه(بخش اول پژوهش)
عصاره تهیه شده حلالیت خوبی درنرمال سالین نشان نداد.بنابراین برای تهیه غلظت های مختلف عصاره ابتدا از کمک حلال Tween20(5%) واز سالین برای رساندن به حجم مورد نظر( ۱۰میلی لیتر) استفاده شد.جهت اثبات بی ضرریامضر بودن کمک حلال ازبخش دوم پژوهش استفاده شد ومقایسه بین گروه شم یادریافت کننده کمک حلال وگروه کنترل صورت گرفت. ولی چون گروه دریافت کننده Tween20(5%)یاگروه شم تفاوت معنی داری با گروه کنترل نشان داد، میزان کمک حلال راتاجایی کاهش داده که تفاوت معنی داری دیده نشدیابه عبارتی ازTween20(1%)به عنوان کمک حلال استفاده شد.
۲-۲-۳ روش انجام آزمایش(بخش دوم پژوهش)
همان طور که گفته شددر این مطالعه از موش های سوری نرنژاد NMRI با وزن۲۲-۲۸گرم استفاده شد.حیوانات پس از انتخاب به صورت تصادفی به دستجات۸ تایی,توزین وشماره گذاری و به سه گروه تقسیم شدند:۱)گروه کنترل که مورد تزریق داخل صفاقی سالین قرار گرفتند.۲)به گروه شم، سالین وکمک حلالTween20(1%)تزریق گردید.۳)گروه آزمایش که شامل سه زیرگروه بود. دراین زیر گروه ها موشها دوزهای mg/kg5/7، ۲۵/۶، ۵ عصاره گیاه به همراه کمک حلال Tween20 (1%) و سالین دریافت کردند.(کلیه تزریق های فوق درحجم۱۰میلی لیتر به ازای هر کیلو گرم وزن بدن تنظیم گردید). وپس از ۲۰ دقیقه به کلیه گروه هابه ازای هرکیلو گرم وزن بدن مقدار۸۰ میلی گرم پنتیلن تترازول به منظور القاء تشنج به روش درون صفاقی تزریق گردید. مقدار تزریق و فاصله زمانی بین تزریق اول و دوم در تمام گروه ها یکسان بود. تمام حیواناتی که مورد دو مرحله تزریق فوق قرار گرفتند از نظر بروز نشانه های تشنجی طی مدت ۲۰ دقیقه مورد ارزیابی قرارگرفتند.
گروه کنترل: شامل موش هایی است که۲۰ دقیقه قبل ازتزریقptz ,به ازای هر کیلو گرم وزن ۱۰ میلی لیتر سالین دریافت کرده اند.
گروه شم:شامل موش هایی است که۲۰ دقیقه قبل ازتزریقptz ,به ازای هر کیلو گرم وزن ازمحلول Tween20(1%)به عنوان کمک حلال که با سالین به حجم۱۰ میلی لیتررسیده است دریافت کرده اند.
گروه های آزمایشی:
شامل موش هایی است که۲۰ دقیقه قبل ازتزریقptz , به ازای هر کیلو گرم وزن غلظت های ۵، ۲۵/۶، ۵/۷میلی گرم عصاره الکلی گیاه درمنه را دریافت کرده اند.
جدول۲-۱: خلاصه ای از روش انجام آزمایش

دانلود متن کامل پایان نامه در سایت fumi.ir